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7、血浆如何灭活,灭活不彻底导致的培养问题?
血浆需彻底灭活,消灭补体的活性,需56℃灭活30min,静置到室温后1200g离心10min,去掉沉淀后再使用。
如果血浆灭活不彻底,在细胞培养前期,会导致贴壁的细胞增多,转瓶或转袋细胞吹打不下来,造成细胞损失,最终导致培养的细胞数量和流式表型没有达到预期效果,血浆没有彻底灭活还可能导致细胞黏连,使细胞死亡,最终导致细胞培养效果不好。
8、细胞数量分离较少,NK细胞如何诱导培养?
需先保证NK培养的起始密度,外周血起始密度为1.3~1.5*106,脐血起始密度为2.0~2.5*106,再确定起始体系,补液体积按比例相应减少,前期补液时添加血浆保证细胞增殖速度。
9、细胞洗涤用DPBS还是生理盐水?
DPBS缓冲液PH值在7.2-7.4之间,是细胞最适合的PH值范围。且在酸碱微量的刺激下PH值基本不会发生变化。而培养细胞使用过的培养基PH值会发生变化,对细胞有伤害,细胞经过DPBS缓冲液清洗会去除废弃的培养基,而保持细胞能在适合的PH值范围之内,良好生长。从而再换新的培养基使细胞继续增殖。
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